Testul Tanaka
Deşi controlul proprietăţilor fizice şi chimice ale fazelor staţionare este foarte important, un nivel constant ridicat de reproductibilitate poate fi asigurat doar printr-o caracterizare cromatografică complexă.
testul Tanaka* este recunoscut pe plan mondial ca fiind cea mai bună metodă de comparare a selectivităţii şi performanţelor coloanelor HPLC. Acest test rezumă şi vizualizează toţi parametrii importanţi necesară la alegerea coloanei HPLC adecvate şi permite realizarea simplă a comparaţiilor.
Pentru descrierea capacităţii, hidrofobiei, selectivităţii sterice şi proprietăţilor silanofilice, este utilizat un set de şapte substanţe. Pentru a facilita ilustrarea şi a recunoaşte rapid calitatea sorbentului, valorile acestor parametrii sunt trasate pe cele şase axe ale unui hexagon.
Cu cât hexagonul este mai simetric şi aria sa este mai mare, cu atât faza staţionară este mai echilibrată din punct de vedere al proprietăţilor sale cromatografice.
(* Prof. Tanaka, Kyoto Institute of Technology, J. of Chrom. Sci. 27, 725, 1989)
Parametrii de caracterizare a sorbenţilor Purospher® HPLC
| Parametri | proprietate a fazei staţionare | factori în pregătirea fazei staţionare |
|
|---|---|---|---|
| k (Pentilbenzen) 80% Metanol |
Capacitatea de retenţie (A) | cantitatea de lanţuri alchil | suprafaţă silice acoperire suprafaţă |
| k (Pentilbenzen) / k (Butilbenzen) 80% Metanol |
Hidrofobie (B) | capacitate hidrofobă | acoperire suprafaţă |
| k (Trifenilen) / k (o-Terţfenill) 80% Metanol |
Selectivitate sterică C) | selectivitate sterică | funcţionalitate silan acoperire suprafaţă |
| k (Cafeină) / k (fenol) 30% Metanol |
Capacitate silanol (D) | capacitate silanol | endcapping silanoli reziduali acoperire suprafaţă |
| k (Benzilamină) / k (fenol) 30% Metanol / 70% tampon fosfat pH 7,6 |
Capacitate schimb ionic (E) |
Capacitate schimb ionic la pH 7 | centre catalitic active silanol rezidual pH 7 |
| k (Benzilamină) / k (fenol) 30% Metanol / 70% tampon fosfat pH 2,7 |
Capacitate schimb ionic (F) |
Capacitate schimb ionic la pH 3 | tratament pH 3 centre catalitic active de silice bazice |
| Tanaka 1 | ||
|---|---|---|
| Testul Tanaka 1 determină capacitatea de retenţie, hidrofobia şi selectivitatea sterică a fazei RP. |  |
|
| Coloană | LiChroCART® 150-4,6 Purospher® STAR RP-18 endcapped, 5μm |
|
| Fază mobilă | Metanol/Apă 80:20 | |
| Debit | 1,0 mL/min | |
| Detecţia | UV 254 nm | |
| Temperatură | 30° C | |
| Volum inj. | 10 μl | |
| Eşantion | 1. Uracil 2. Butilbenzen 3. o-Terfenil 4. Pentilbenzen 5. Trifenilenă |
|
| Tanaka 2 | ||
|---|---|---|
| Testul Tanaka 2 (Cromatograma A) ilustrează proprietăţile silanofile ale fazelor staţionare. Cromatograma B nu face parte din testul Tanaka 2. Testul fenol/Piridină măsoară activitatea silanolului. |  |
|
| Coloană | LiChroCART® 125-4 Purospher® STAR RP-18 e, 5 μm |
|
| Fază mobilă | A: Metanol / Apă 30:70 (v/v) B: Acetonitril / Apă 30:70 (v/v) |
|
| Debit | 1,0 mL/min | |
| Detecţia | UV 254 nm | |
| Eşantion | A: Uracil (1), Cafeină (2), Fenol (3) B: Piridină (1), Fenol (2) |
|
| Tanaka 3+4 | ||
|---|---|---|
| Rezultatele obţinute cu Tanaka 3 arată dacă dezactivarea grupelor de silanol rezidual este terminată. Tanaka 4 indică absenţa esenţială a metalului în sorbent |
 |
|
| Coloană | LiChroCART® 125-4 Purospher® STAR RP-18 endcapped, 5 μm |
|
| Fază mobilă | Metanol / 0,02 M Acid fosforic 30:70 (v/v) |
|
| Debit | 0,6 ml/min | |
| Detecţia | UV 254 nm | |
| Eşantion | 1. Uracil 2. Benzilamină 3. Fenol |
|
În comparaţie cu alte coloane de „înaltă puritate” RP-18 endcapped, Purospher® STAR RP-18 endcapped demonstrează cea mai bună selectivitate totală şi datorită acestui fapt, este cea mai bună opţiune pentru o separare reuşită.
A: K (Pentilbenzen)
B: α (Pentil-/ Butil benzen)
C: α (Trifenilen/ o-Terfenil)
D: α (Cafeină Fenol)
E: α (Benzilamină/ Fenol; pH 7,6)
F: α (Benzilamină/ Fenol; pH 2,7)
